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去外泌体胎牛血清采用超滤法如何进行提取?

发布时间:2021/8/6 11:22:00      阅读次数:385

   去外泌体胎牛血清富含多种营养,满足细胞粘附、生长、增殖、解毒等需求。可为临床治疗骨破坏提供新思路。同时,国外的研究表明,使用祛除外泌体的胎牛血清培养细胞,大多数细胞的生长速率均降低,提示血清中的外泌体在细胞生长及存活方面起到一定的作用。

  去外泌体胎牛血清超滤法提取步骤:
  超滤法适用于细胞上清的提取,一般需要200ml培养基,适用于纯化大量外泌体。常见的过滤膜有孔径0.8微米,0.45微米或0.22微米,可用于收集大于800纳米,400纳米或200纳米的外泌体。超滤离心法简单高效,且不影响外泌体的生物活性。
  (1)低速离心以除去细胞成分,500g离心10min。收集上清。
  (2)使用0.22微米过滤器过滤细胞碎片以及大囊泡。收集滤液。
  (3)将滤液转移至装有超滤膜的超滤仪,氮气加压过滤。收集滤液。
  (4)将过滤后悬液转移至离心管,100000 g离心40min。收集沉淀。
  (5)外泌体重悬于适量培养基中。使用0.22微米过滤器过滤,分装外泌体悬液,-80度保存,避免反复冻融。
  外泌体(exosomes)是活细胞分泌的直径约为30-150nm的膜性囊泡,准确来讲,外泌体是一类由细胞释放的细胞外囊泡。广泛存在于多种体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳。根据其生物合成或释放途径可以对细胞外囊泡进行分类:
  1.外泌体(exosomes):起源于内吞途径,直径为30-150nm,其密度约为1.11-1.19g mL-1;
  2.微粒/微囊泡(microparticles):直接从质膜释放,直径约100-1000nm;
  3.凋亡小体(apoptoticbody/bleb):由细胞凋亡产生,直径约为50nm-2um;
  4.肿瘤小泡(large oncosomes):由肿瘤细胞释放产生,直径约1-10um;
  5.以及其他各种EV亚群。
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