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山羊白介素10(IL-10)ELISA试剂盒

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包装规格48T/96T

检测方法:酶联免疫

检测标本:血清、血浆、尿液、组织匀浆等

本试剂盒仅供科研使用!

试剂盒组成

 

        名  称

96孔配置

12孔×8条

48孔配置

12孔×4条

备  注

 1

标准品(500ng/ml)

0.5ml

0.5ml

稀释即用型

 2 

酶标包被板

1块

1块

已包被即用型

 3

标准品稀释液

3ml

3ml

即用型

 4

链霉亲和素-HRP

6ml

3ml

即用型

 5

30x倍浓缩洗涤液

20ml

20ml

蒸馏水稀释

 6

生物素标记抗体

2ml

2ml

即用型

 7

显色剂A液

6ml

3ml

即用型

 8

显色剂B液

6ml

3ml

即用型

 9

终止液

6ml

3ml

即用型

10

说明书

1份

1份

即用型

11

封板膜

2张

2张

不可反复使用

12

密封袋

1个

1个

即用型

需要而未提供的试剂和器材

1.   酶标仪(450nm检测波长滤光片,570nm或630nm校正波长滤光片) 。

2.   洗板机(可调注液量,保证每孔洗液加至0.35ml而不溢出)。

3.   超净工作台,生物安全柜,通风柜。

4.   高精度单道加液器(量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

5.   高精度多道加液器(8道或12道,量程为50-300μl).

6.   37℃恒温箱。

7.   低温离心机。

8.   电冰箱(4℃,-20℃,-86℃).

9.漩涡混合仪,低频振荡器等

注意事项

1. 2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

3. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

4. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

5. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

6. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸,使用时必须注意安全。

7. 各步骤加样均应使用加样器,并经常校准其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

8. 每次试验测定的同时做标准曲线,。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔最高浓度的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n)。

9. 配制试剂时,要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂,充分混匀对测试结果尤为重要,最好使用微量振荡器(使用最低频率),如无微量振荡器,可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟,例如做圆周动作,使加入孔中的反应液混匀。

10. 实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作,并在使用前充分预热。

11. 手工洗板应注意:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

 

样本要求

1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存或根据存放,时间做相应温度调整,但应避免反复冻融,(由于样本种类过多,每个单位处理方式不一样,本说明书不做详细介绍)。

 

操作程序

1. 标准品的稀释:(本试剂系统提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释)按下表格执行:

 250ng/ml

(5号标准品)

120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液

 125ng/ml

(4号标准品)

120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液

   62.5ng/ml

(3号标准品)

120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液

  31.2ng/ml

(2号标准品)

120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液

  15.6ng/ml

(1号标准品)

120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液

 

2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3. 加样:(详细操作流程请联系客服索要说明书

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

7. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

 

结果判断

1.每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。(若不减零孔值,标准曲线的零孔应相交于Y轴)

2.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种熟悉应用软件来计算。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。推荐使用专业制作曲线软件进行分析计算结果。

4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。

 

 

 

 

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