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MCF-10A 人乳腺细胞 (STR鉴定)

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 细胞特性

1) 来源:人

2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长

3) 含量:>1x106

4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

 

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:

(1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;

(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

(3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。

 

细胞用途:仅供科研使用。

 

细胞接收后的处理:

1) 收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态,酒精消毒瓶壁并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3) 弃去T25瓶中的培养基,添加6ml完全培养基。

4) 如果细胞长满90%请及时进行细胞传代。

 

细胞培养步骤

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备MEGM kit(Lonza/Clonetics,CC-3150)培养基,包括500ml基础培养基和5ml因子;cholera toxin(霍乱毒素) 100ng/ml,

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:92.5%完全培养基,7.5%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养,补加培养基至6ml。24-48h后换液。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化。

3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1:3到1:4比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。

注:第一次传代推荐传代比例为1:2,以后传代比例可根据客户需要自己决定。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

下面T25瓶为类;

1,细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化,可使用血球计数板计数。

2,4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml完全培养基重悬细胞,根据细胞数量加入DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为7.5%,细胞密度1-2xE6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。

3,将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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