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22Rv1 人前列腺癌细胞(STR鉴定)

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 细胞介绍


22RV1是来自异种移植(在阉割引起前列腺癌衰退又在其父亲的雄性激素信赖型CWR22嫁接后复发的小鼠中连续传代)的人前列腺癌上皮细胞系。此细胞系表达前列腺特异抗原。二羟基睾丸脂酮轻微刺激细胞生长,经western blot检测溶解产物与抗雄性激素受体抗体起免疫反应。EGF刺激细胞生长,但TGFβ-1不能抑制细胞生长。该细胞在裸鼠中成瘤。

细胞特性

1)来源:前列腺癌

2)形态:上皮细胞样

3)含量:>1x106 个/mL

4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5)规格:T75瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存

(1)使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。

(2)收到细胞后,可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。

(3)具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途:仅供科研使用。
                       
细胞培养步骤

一.培养基及培养冻存条件准备:


1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二.细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存

待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

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