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干扰素试剂盒

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   干扰素试剂盒实验原理:

  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。  往预先包被(IFN-γ)elisa检测,γ干扰素捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的(IFN-γ)elisa检测,γ干扰素呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
  干扰素试剂盒常见技术指南:
  1、选择抗体时好选择一个单抗和一个多抗进行配对;若选择两个单抗,必须识别不同表位的抗体;从同一家公司选择抗体对。
  2、ELISA实验中为了确定佳信号和低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
  3、标准品的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的细节。在使用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。
  4、一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
  5、为了优化灵敏度,建议过夜孵育标准品和标本。
  6、若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
  7、当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相干的Ig。
  干扰素试剂盒性能:
  1.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
  2.  重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
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