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人脐静脉内皮细胞(HUVEC)
细胞介绍
该细胞来源于人脐静脉内皮，可在半固体培养基中形成克隆，在免疫抑制小鼠中不能形成肿瘤。
细胞特性
1） 来源：人脐带组织
2） 形态：内皮细胞
3） 含量：>1x106
4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞接收后的处理：
1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。
4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。
5） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。
6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。
细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备内皮细胞专用培养基包含（内皮细胞基础培养基，优质胎牛血清，5%；添加对应因子1%；双抗，1%） 。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
一、仪器与试剂
细胞复苏、传代与冻存操作流程
仪器 试剂 耗材
离心机 胎牛血清（FBS） 离心管（15ml、50ml）
生物安全柜 无菌 1×PBS pH=7.2 T-25 细胞培养瓶
电动移液器 0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA 一次性无菌移液管（2ml、5ml、10ml）
CO2 培养箱 完全培养基（含血清） 1.8mL 冻存管
倒置显微镜 液氮罐 冻存液：90%FBS+10%DMSO 异丙醇 程序降温盒
恒温水浴锅
超低温冰箱
护目镜、厚毛线手套等二、操作流程：
复苏
1) 将恒温水浴锅中的水预热到 37℃；
2) 准备一支 15ml 离心管，加入 5ml 含 10%FBS 的完全培养基，放入 37℃水浴锅中预热；
3) 戴上护目镜，厚毛线手套后，从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入 37℃恒温水浴锅中复温晃动冻存管以提高复温速率；
4) 将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中，混匀后，1000rpm 离心 5min；
5) 准备一个 T-25 培养瓶，写上细胞名称、日期，再加入 4ml 完全培养基；
6) 离心完成后弃去上清，用 1ml 完全培养基重悬细胞后，转入 T-25 细胞培养中，混匀后转入
CO2 培养箱中培养静置。
传代 （细胞传代建议一传二）
1) 当细胞汇合度达到 85%以上时，可进行传代。
2) 在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的培养基；
3) 向培养瓶内加入 3ml 无菌的 1×PBS 后，水平放置培养瓶，使 PBS 能够浸润到培养瓶底面上所有的面积，吸弃 PBS；
4) 向瓶内加入消化液 1ml，浸润底面后放入 37℃ CO2 培养箱中孵育 1~2min；
5) 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，若全部消化下来则直接向培养瓶内加入
2ml 含 10%FBS 的培养基（这里的培养基可以用DMEM或者其他的基础培养基，只用于中和胰酶时使用）中，将悬液吸入 15ml 离心管；。
6) 1000rpm 离心 5min；
7) 准备两个新的 T-25 培养瓶，各加入 4ml 完全培养基。
8) 离心完成后，弃上清，用 2ml 完全培养基重悬离心细胞，将重悬后的
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