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JM110 感受态

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 产品简介:

大肠杆菌 JM110 菌株具有硫酸链霉素抗性(StrR);是甲基化基因 dam、dcm 缺失的菌株,从该菌株 中提取得到的质粒 DNA,可被对 dam 和 dcm 甲基化敏感的内切酶切割;该菌株携带的 lacI q lacZΔM15 突变使其可以进行蓝白斑筛选。但由于该菌株的转化效率不太高,一般不用于质粒 构建的宿主,而是用于质粒转化以便进行质粒去甲基化。经 pUC18 质粒转化检测,JM110 感受态 细胞的转化效率可达 107 cfu/μg DNA 以上。

产品组成组分:

CC96104-01 CC96104-02 CC96104-03 JM110 化学感受态细胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL 。

定制基因型:

rpsL (StrR ) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIq lacZΔM15]

存储条件:

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制 :

无外源质粒 DNA 残留; 化学法转化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法:

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰浴中静置 2-3 min;

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项 :

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用;

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。

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