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产品简介:
MG1655(DE3)菌株来源于 W1485,是 K12 的衍生菌株,是一种经过较少改造、比较接近于“野生型” 的大肠杆菌工程菌株。MG1655(DE3)外观形态标准,既可做为扩增大肠杆菌野生型基因的模板使 用,也可作为蛋白表达的宿主菌株使用;T7 RNA 聚合酶位于 λ 噬菌体 DE3 区,该区域被整合于 MG1655 的染色体上,该菌株不含核酸酶 endA1 突变。经 pUC18 质粒转化检测,MG1655(DE3)感 受态细胞的转化效率可达 10 8 cfu/μg DNA。
产品组成组分:
CC96171-01 CC96171-02 CC96171-03 MG1655(DE3) 化学感受态细胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL 。
定制基因型:
K12 F - λ - ilvG- rfb-50 rph-1 (DE3)
存储条件:
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制 :
无外源质粒 DNA 残留; 化学法转化效率≥10 8 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法:
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;
4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;
5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项 :
1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;
4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。