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TOP10感受态产品简介:
本品为使用大肠杆菌 Top10 菌株制备的高效化学感受态细胞,转化效率可达 108 cfu/μg DNA 以上, 被广泛用于质粒转化、基因克隆等;可以使用蓝白斑筛选(注:不需额外添加 IPTG 来诱导 lacZ 表 达)。
产品组成组分 :
CC96105-01 CC96105-02 CC96105-03 Top10 感受态细胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL 定制 基因型:F - mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
存储条件:
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 产品特性 -属于 E. coli K12 系列,可用于基因克隆等,菌株生长速度较快; -在进行蓝白斑筛选时,仅需在平板上预先涂布 X-gal 即可,无需添加 IPTG; -不可用于以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的蛋白表达。
质量控制:
无外源质粒 DNA 残留; 化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
TOP10感受态使用方法:
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90 s 后,立刻置于冰浴中静置 2-3 min;
4. 向离心管中加入900 μL LB或SOC培养基(室温或37 ℃预热),然后置于37 ℃摇床复壮45 min;
5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。
TOP10感受态注意事项:
1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;
4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。