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产品简介：
DH10B 电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。DH10B 菌株来源于 MC1061 菌株， mcrA、mcrBC 及 mrr 突变使 DH10B 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA (无论真 核生物还是原核生物的基因组 DNA 都能被高效的转入 DH10B 中)。recA1 和 endA1 的突变有利于插 入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。φ80dlacZ∆M15 标记的存在使 DH10B 可用于蓝白斑筛 选，rpsL 赋予其链霉素抗性。 DH10B 感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建，经特殊 工艺制作，pUC18 质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。
产品组成 组分 ：
EC96101-01 EC96101-02 EC96101-03 DH10B 感受态细胞 10 × 50 μL 100 ×50μL。
定制基因型：
F - mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG
存储条件：
-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制：
无外源质粒 DNA 残留； 电转法转化效率≥1010 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法 ：
1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟， 使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯 盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 DH10B 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接 产物)并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC18； B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重 悬，DNA 浓度不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按 所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心 管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。 DH10B 电转感受态 #EC96101 吐露港生物 网址：www.tolobio.com 咨询：400-032-6070 销售：sales@tolobio.com 支持：support@tolobio.com Version：20190101. 最新、最全使用方法以官网说明书为准！ 6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较 大，若全部涂板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小 时。
注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风 险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍， 转化效率下降一个数量级。
6. 对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低 转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物 可相应减少最终用于涂板的菌量。
8. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
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