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ArcticExpress(DE3) 感受态

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 产品简介:

ArcticExpress (DE3)来源于 E. coli B 菌株,为 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型菌株,可促进表达蛋白的 稳定。ArcticExpress (DE3)菌株染色体 DNA 中整合了λ噬菌体 DE3 区,使得 ArcticExpress (DE3)菌 株可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶,广泛用于 pET 系列,pGEX,pMAL 等质粒 的蛋白表达。ArcticExpress (DE3)菌株具有四环素,庆大霉素抗性,endA1 突变有利于质粒 DNA 的 稳定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使 ArcticExpress (DE3)可以表达适应低温的伴侣蛋白 Cpn10 和 Cpn60(来自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10 和 Cpn60 伴侣蛋白在 4 - 12 ℃表现出较高活性, 在 ArcticExpress (DE3)细胞中表达时,可降低重组蛋白包涵体的形成,增加可溶重组蛋白的表达量 及生物活性,比传统的原核表达伴侣蛋白 GroEL、GroES 等具有更加优异的促融性能。吐露港生产 的 ArcticExpress (DE3)感受态细胞经特殊工艺制作,pUC18 质粒检测转化效率达 108 cfu/μg DNA。

产品组成组分:

CC96183-01 CC96183-02 CC96183-03 ArcticExpress(DE3) 感受态细胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL

定制基因型:

E. coli B F– ompT hsdS (rB – mB – ) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]

存储条件:

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制:

无外源质粒 DNA 残留; 化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法:

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;

4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项:

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。

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