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BL21(DE3) 感受态

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 产品简介:

本品为使用大肠杆菌 BL21(DE3)菌株制备的高效化学感受态细胞,转化效率超过 107 cfu/μg DNA, 可以用于 pET 等系列质粒的蛋白高效表达。

产品组成组分:

CC96107-01 CC96107-02 CC96107-03 BL21(DE3)感受态细胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL。

定制基因型:

F - ompT hsdSB (rB -mB - ) gal dcm (DE3)

存储条件:

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 产品特性 -BL21(DE3)品系,T7 RNA 聚合酶位于 λ 噬菌体 DE3 区,该区域被整合于 BL21 的染色体上; -是以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效蛋白表达宿主,适合于非病毒蛋白重组表达。

质量控制:

无外源质粒 DNA 残留; 化学法转化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法 :

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90 s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;

4. 向离心管中加入900 μL LB或SOC培养基(室温或37 ℃预热),然后置于37 ℃摇床复壮45 min;

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项 :

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。

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