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Origami 2 感受态

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 产品简介:

Origami 2 系列菌株是由 K-12 菌株衍生而来,在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变,

这使得该菌株能够更加高效地表达含二硫键的蛋白。与 Origami 系列菌 株相比,Origami 2 对卡那抗生素敏感,因而能够用于含卡

纳抗性质粒的转化。该菌株携带的 gor 基因突变使得其和原来的 Origami(DE3)菌株一样具有四环素抗性。该菌株含有溶源的 λDE3

序 列,可表达 T7 RNA 聚合酶,因而适用于 pET 系列及其他 T7 启动子系列载体。该菌株含有的 pLysS 质粒(氯霉素抗性)能够

产生 T7 溶菌酶,可以有效降低目的蛋白的本底表达水平。pLysS 质粒的起始复制位点是 p15 Origin, 这使得该质粒能和 pUC-及 pBR

322-的衍生质粒共存。经 pUC18 质粒转化检测,Origami 2 (DE3)pLysS 感受态细胞的转化效率可达 107 cfu/μg DNA 以上。

产品组成组分:

CC96114-01 CC96114-02 CC96114-03 Origami 2 (DE3)pLysS 感受态细胞 10 × 100μL 100 × 100μL。

定制基因型:

Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F ’ [lac+ lacIq pro] (DE3) gor522::Tn10

trxB pLysS (CamR, StrR, TetR)。

存储条件:

-80 ℃保存,请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制:

除 pLysS 质粒外,无外源质粒 DNA 残留; 化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法:

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰浴中静置 2-3 min;

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项:

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。

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