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Origami B 感受态

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 产品简介

Origami B系列菌株同样具有Origami系列菌株含有的trxB/gor基因突变,但是该菌株是来源于BL21 的 lacZY 基因突变株。所以 Origami B 系列

感受态细胞是集合 BL21,Tuner 和 Origami 三种细胞株 的优点于一身。在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上

同时含有突变,这 使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键,有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。TrxB 和 Gor 基因突变使得质

粒能够分别具有卡那和四环素抗性,所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性 质粒的蛋白表达。Origami B 感受态细胞来源于含有 lacZY 基因

突变的 BL21 菌株,能够通过 IPTG 高效控制目的基因的表达。经 PUC18 质粒检测,感受态细胞的效率可达 108 cfu/μg DNA。

产品组成组分

CC96144-01 CC96144-02 CC96144-03 Origami B 感受态细胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL

定制 基因型

F - ompT hsdSB (rB - mB - ) gal dcm lacY1 ahpC gor522:: Tn10 trxB (KanR , TetR )

存储条件

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 质量控制 无外源质粒 DNA 残留; 化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;

4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;

5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;

3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;

4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。

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