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产品简介
Rosetta-gami 2 (DE3)中 pRARE2 赋予其 Rosetta2 菌株的优点——补充大肠杆菌缺乏的 7 种稀有密码 子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA 和 CGG)
对应的 tRNA，提高外源基因的表达水平。 gor522::Tn10 trxB 赋予其 Origami2 菌株的优点——突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)
和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有 利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白
的可溶性；同时该菌株不具有卡那霉素抗 性，可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表达。该菌株染色体整合了 λ 噬菌体 DE3 区 (DE3 区含有 T7 噬菌
体 RNA 聚合酶)适合 T7 启动子诱导的蛋白表达。经 pUC18 质粒转化检测，Rosetta-gami 2 (DE3)感受态细胞的转化效率可达 108 cfu/μg DNA 以上。
产品组成组分
CC96117-01 CC96117-02 CC96117-03 Rosetta-gami 2 (DE3) 化学感受态细胞 10 × 100 μL 100× 100 μL。
定制基因型
Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F’[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR)。
存储条件
-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除 pRARE2 外，无外源质粒 DNA 残留； 化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；
4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；
5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项
1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用；
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；
3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；
4. 为确保最高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。
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