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产品简介
Tuner(DE3)菌株是 BL21 菌株的 lacZY 基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变株,此突变导致 IPTG 以均一 速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞,
产生更加严格、均一的浓度依赖。此菌株用于高效表达克 隆于含有噬菌体 T7 启动子的表达载体 (如 pET 系列)的基因。λ 噬菌体 DE3 区含
有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶,该区整合于 Tuner 的染色体上,所以称为 Tuner(DE3),可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠 杆菌 RNA 聚合酶,
可用于 pET 系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。Tuner(DE3)感受态细胞由 特殊工艺制作,pUC18 质粒检测转化效率达 107 cfu/μg DNA。
产品组成组分
CC96180-01 CC96180-02 CC96180-03 Tuner(DE3)感受态细胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL
定制 基因型
F - ompT hsdSB (rB - mB - ) gal dcm lacY1 λ(DE3)
存储条件
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 质量控制 无外源质粒 DNA 残留; 化学法转化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;
4. 向离心管中加入 900μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;
5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。 注意事项
1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;
4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。