暂无数据
产品名称
起订量
单价(含增值税)
库存(PCS)
起订数量
产品简介
EHA105 菌株由 EHA101 菌株改造而来，为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基 因 Rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型 Ti 质粒 pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件， pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 TDNA 顺利转移)。在 EHA105 菌株中转入 help 质粒：pSoup 即为 EHA105 (pSoup)菌株，可帮助 pGreen，62SK，pGs2 系列质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（Tet）抗性，适用于水稻、 烟草等植物的转基因操作。本公司生产的 EHA105(pSoup)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作， pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率≥ 104 cfu/μg DNA。
产品组成组分
CC96314-01 CC96314-02 CC96314-02 EHA105(pSoup) 化学感受态细胞 10 ×100 μL 100 ×100 μL 定制 基因型：C58 (RifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine (pSoup-TetR)
存储条件
-80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除琥珀碱型 Ti 质粒 pEHA105 和 pSoup 质粒外，无外源质粒 DNA 残留 化学法转化效率≥104 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 10 分钟、液氮 5 分 钟（或干冰乙醇浴和-80℃冰冻）、37 ℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟；
3.加入 900 μl 无抗生素的 YEB 液体培养基，于 28 ℃振荡培养 2~3 小时；
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板 上，倒置放于 28 ℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50 μg/ml Kan 时，28 ℃培养 48 h 即可；平板中同 时加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 时，需 28 ℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 则需要 28℃ 培养 72-90 h）。
注意事项
1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；
3. 利福平浓度不应高于 25 μg/μl，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率；
4.因为 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略）， 一般培养农杆菌时不考虑添加相应抗生素。
(pdf)
