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产品简介
P19 蛋白来源于番茄丛矮病毒，可抑制宿主对外源基因的 RNA 沉默效应，提高异源基因转录本的稳定性， 进而促进异源蛋白的表达，广泛应用于转基因植物及烟草叶片，拟南芥叶片，番茄叶片或原生质体的瞬时 表达系统中。GV3101 菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 Rif，为了便于转 化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因 且可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 质粒含有筛选标签： Gent ， 赋予 GV3101 菌株庆大霉素抗性；在 GV3101 菌株中转入 help 质粒： pSoup-p19 即为 GV3101(pSoup-p19) 菌株，可帮助 pGreen，62SK，pGs2 等质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（Tet）抗性。适用 于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。本公司开发的 GV3101 (pSoup-p19)电转感受态特别适 用于大质粒的转化：经 pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>105 cfu/μg DNA。
产品组成组分
EC96303-01 EC96303-02 EC96303-03 GV3101（pSoup-p19） 10 ×50μL 100 ×50μL
定制 电转感受态细胞 基因型
C58 (RifR ) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR ) Nopaline(pSoup-p19-TetR )
存储条件
-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 和 pSoup-p19 质粒外，无外源质粒 DNA 残留； 电转法转化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 将新的 2 mm 电击杯插入冰中预冷；或者将储存于 75%乙醇中的 2 mm 电击杯和杯盖取出，在超净工 作台中将其倒置于干净的吸水纸上，使乙醇充分挥发，然后插入冰中预冷；
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 质粒 DNA（体积不大于 5μl），用 200μl 枪头将感受态-质粒混合物快速转移到预冷的电击杯中，盖上杯盖；
3. 开启电转仪，设置参数（2500 V ，200 Ω，25μF），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成后快速插 入冰中，加入 900μl 无抗生素的 YEB 并将感受态细胞转移到无菌空管中，28 ℃振荡培养 2~3 小时。 （注：此电转化参数为 Bio-rad 推荐，使用者也可使用电转仪所推荐的 Protocol 进行操作）
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清将菌体轻轻吹匀，并涂布于含相应抗生素的 YEB 平板上， 倒置放于 28℃培养箱培养 2~3 天（当平板只含有 50μg/ml Kan 时，28℃培养 48 h 即可；平板中同时加入 50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 时，需 28 ℃培养 60h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 时，则需要 28 ℃ 培养 72~90 h）。
注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用；
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；
3. 利福平浓度不应高于 25μg/μl，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率；
4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加。
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