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细胞驯化悬浮细胞株（CHO-K1）
细胞名称：CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株
描述：该细胞株是源自成年中国仓鼠卵巢深入活体组织切片的CHO细胞的亚克隆。
动物种别：中国仓鼠 雌
组织来源：卵巢
形态：上皮细胞
细胞驯化前的培养基的培养条件：F12K培养基(SIGMA,货号N3520，添加NaHCO3 2.5g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度。
含量：>1x106 细胞数
规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
用途：仅供科研使用。
细胞株驯化：
复苏CHO-K1细胞转入T25 cm2细胞培养瓶，以F12K基础培养基添加10%血清培养，待细胞长满单层后，加入 0.25 % 胰蛋白酶消化，传代至装有完全培养基的T25 cm2细胞培养瓶（Corning）中继续培养，当细胞铺满瓶底时，即得贴壁 CHO-K1 细胞。取贴壁CHO-K1 细胞，换液，加入15 mL含血清的完全基和 15 mL无血清CHO-K1专用培养基，2天后吸出一半培养液，加入等量的无血清CHO-K1，每2天重复一次此操作，直到胎牛血清浓度低于 1 %后，以基础培养基B001 继续培养，即培养基中血清浓度依次以 5 %，2 .5 %，1.25%，0.625 %，0 %降低。细胞在无血清CHO-K1专用培养基中密度达到5 ×106cells/ mL时，即得悬浮 CHO-K1 细胞。培养条件：37℃，5 % CO2培养箱中静置培养。
运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理：
1） 收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备： CHO GROW CD2 培养基 98 % GlutaMAX-1谷氨酰胺 1%，P/S青霉素-链霉素 1%
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90% CHO-K1专用培养基，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1） 冻存细胞的复苏：：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存，收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106 ~ 1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106 ~ 1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项：
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
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